ANALISIS DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

RESUMEN

Se preparó en primera instancia las pruebas para aminoácidos iniciando con la prueba de ninhidrina que nos permite detectar la presencia de aminoácidos,  donde se emplearon tres diferentes aminoácidos a los cuales se les agrego 5 gotas de ninhidrina y todos dieron positiva la prueba. Después la prueba Xantoproteica en la cual se emplearon los tres aminoácidos agregándoles 6 gotas de HNO3 concentrado a cada uno, la prueba dio positivo para la tirosina y el triptófano. Para la prueba del ácido glioxílico se agregó 2ml de los aminoácidos y 2ml de ácido acético glacial y luego se les agrego H2SO4 concentrado, se dejó reposar al aire libre hasta la aparición de dos capas en la cual dio positiva para el triptófano. Para la identificación de azufre solo se utilizó la cisteína agregándole 1 ml de NaOH 10M y luego 5 gotas de acetato de plomo, que en medio alcalino el azufre reacciona formando sulfuros que al calentar dio un precipitado negro. Para las pruebas de las proteínas se realizó la prueba de Biureth donde se reconoce los enlaces peptídicos, se utilizó 1ml de albumina adicionándole CuSO4 y 2ml de NaOH 10M, dio una coloración celeste y morado siendo positiva la prueba. En la desnaturalización de proteínas por calor se comparó el tiempo de coagulación al calentar, con la desnaturalización en los cambios bruscos de pH se colocó en dos tubos 1ml de albumina al primer tubo se le agrego 10 gotas de HCl 1M, al segundo NaOH 1M y se comparó en cuál de los dos fue más rápida la reacción y por ultimo por metales pesados que fue la más rápida al agregarle a la albumina 5 gotas de acetato de plomo.

OBJETIVOS:

• Aplicar las pruebas de cualitativas generales y específicas que permitan reconocer grupos químicos de los aminoácidos y proteínas.
• Someter soluciones de proteínas a desnaturalización con agentes físicos y químicos.

INTRODUCCION

Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras células. Todas las proteínas son polímeros, y los a-aminoácidos son los monómeros que se combinan para formarlas. El grupo amino está unido al carbono a, el carbono contiguo al grupo carboxilo; de aquí proviene el nombre de a-aminoácido (Mathews, 2002). Los aminoácidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento químico. Las síntesis de las proteínas ocurren mediante la unión entre sí de las cadenas de aminoácidos. Los distintos aminoácidos imparten diferentes comportamientos químicos en la estructura de las proteínas. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas las proteínas reaccionan con una variedad de compuestos formando productos coloreados. Existen reacciones de coloración que son específicas para aminoácidos de esas proteínas y son importantes tanto para la detección como para el dopaje de aminoácidos y proteínas. Existen también reacciones generales porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas las proteínas como grupos amino o uniones peptídicas (ninhidrina y biuret) (Gil, Hurtado & Escalante, 2014).

Una de las propiedades más importantes de las cadenas laterales de los aminoácidos, es su capacidad de interacción con los solventes acuosos o con los reactivos que permiten su identificación, es decir su grado de polaridad o no polaridad (Peña, 2004).

MATERIALES Y REACTIVOS

Soluciones al 1% de glicina, tirosina, triptófano, cisteína, ninhidrina, ácido nítrico concentrado, hidróxido de sodio 10 M, ácido acético glacial, ácido sulfúrico concentrado, acetato de plomo, reactivo de Biureth, soluciones de albumina y caseína, HCl 1%. Tubos de ensayo, goteros, plancha baño maría, vasos químicos, probeta 10 mL.

METODOLOGIA

(1) En la práctica se realizaron diferentes reacciones, entre ellas están la reacción de Ninhidrina, en la que se etiquetaron 3 tubos de ensayo, cada uno con el nombre correspondiente de los aminoácidos: cistina, prolina, tirosina. A cada uno de ellos se le agregó 10 gotas del reactivo.

(2) En la reacción Xantoproteica, se etiquetaron 3 tubos de ensayo de la misma manera que en reacción anterior. Se le agregó a cada tubo 10 gotas de aminoácido correspondiente (glicina, tirosina, triptófano) y 6 gotas de ácido nítrico concentrado, después se le agregó a cada tubo una solución de NaOH 10 M.

(3)  La siguiente reacción fue una prueba del ácido glicoxílico en la que se utilizó 1mL de aminoácido (triptófano), luego se le agregó 1mL de ácido glicoxílico y con cuidado se adicionó por las paredes del tubo 1mL de ácido sulfúrico, se dejó reposar por unos minutos, para luego observar resultados.

(4) Para la prueba de identificación de azufre se emplearon 2 tubos de ensayo cada uno rotulado con un aminoácido y 10 gotas de estas (cisteína y estas prolina), luego se le agregó 10 gotas de hidróxido de sodio 10M y 5 gotas de acetato de plomo, luego se agitó y se puso en baño maría hasta ebullición.

(5) Otra reacción en la práctica es de Biureth, en esta se etiquetó 1 tubo de ensayo como: albumina o caseína. Se le agregó al tubo 1mL de Biureth más 10 gotas de la proteína.

(6) La próxima prueba de desnaturalización por pH y calor, se emplearon 2 tubos de ensayo, a uno se le agregó 5 mL de proteína (caseína) y 10 gotas de HCl 1M, al segundo tubo se hizo lo mismo, pero con 10 gotas de hidróxido de sodio 1M, los tubos se agitaron y fueron llevados a baño maría durante un par de minutos.

(7) En la última prueba de desnaturalización por metales pesados, se utilizó un tubo de ensayo al cual se le agregó 5 mL de proteína y 3 gotas acetato de plomo.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Prueba para aminoácidos

Prueba de Ninhidrina

Se colocó 10 gotas de los diferentes aminoácidos y luego 5 gotas de Ninhidrina a cada uno, dejándolos a baño maría. En la (tabla 1) se encuentran los resultados de la prueba.

Tabla 1. Resultados de la prueba de Ninhidrina.

La ninhidrina descarboxila y desamina al aminoácido es decir, es un poderoso agente oxidante y reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis. La ninhidrina reducida formada por la reacción reacciona con una molécula de amoniaco resultante de la desaminación para formar un compuesto complejo que presenta coloración violeta de Ruhemann (figura 1). De esta forma se puede determinar cuantitativamente  coloreada de los aminoácidos por espectrofotometría, y también por gasometría, gracias al dióxido de carbono que se forma (Teijón, et al. 2006). Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos; en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres. (González, 2011).

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