Componentes De Chile Guajillo

Resumen

En el siguiente informe se presentara como se llevo a cabo la purificación de los pigmentos del Capsicum annuum L. (chille guajillo), Se dejo macerar chile guajillo con hexano y se trituro para poder extraer la mayor cantidad de pigmento después se hiso la cromatografía preparativa (capa delgada) para saber que disolvente elegir para la extracción de los componentes de chile guajillo, después se realizo con la cromatografía analítica (columna) y con éter de petróleo y cloroformo 9:1, 8:2, 7:3, gel de sílice y arena se empaco la columna(bureta). Al agregar el pigmento se logro observar la separación de los carotenos y se lograron recolectar unos cuantos, a los cuales se les hiso la cromatografía de capa delgada para comprobar que tipo de caroteno es α (alfa), β (beta), γ (gama)

Introducción

Al enfrentarse con el problema de separar una mezcla completamente desconocida lo mejor es emplear un ensayo cromatográfico por medio de la cromatografía en capa fina, la cual dará detalles acerca de la complejidad de la mezcla a separar. La cromatografía en capa fina es uno de los métodos analíticos más sencillos ya que se utiliza poca cantidad de muestra, pues es sensible en alto grado y requiere de poco tiempo para separar compuestos estructuralmente muy parecidos. Los resultados de la cromatografía son muy valiosos pues ayudan a seleccionar el adsorbente y eluyentes adecuados que pueden ser empleados para una separación en columna.

CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

La cromatografía sobre papel es muy versátil y sus métodos se emplean con mucha frecuencia, pero su uso se limita a separaciones sobre celulosa, ya que otros medios adsorbentes, como la alúmina y el gel de sílice, no pueden prepararse en forma de tiras. Esta dificultad puede superarse fabricando capas finas de estas sustancias sobre placas de vidrio. Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas.

Se usan dos tipos de capas: la capa compacta que se adhiere a la placa de vidrio por medio de un agente aglomerante incorporado al adsorbente o por las cualidades adherentes del propio material, y capa suelta.

Estas últimas solo se emplean en la determinación de la actividad de los adsorbentes y en uno de dos casos especiales.

Las separaciones sobre la capa fina se parecen en muchos aspectos a la del papel, pero es posible la elección de muchos más medios, ya que con esta técnica pueden realizarse separaciones por reparto, filtración sobre gel, adsorción e intercambio iónico.

Las propiedades particulares de la cromatografía en capa fina permiten desarrollar el fraccionamiento en un periodo de tiempo mucho menor. Una razón de esto es el tamaño de las partículas que constituyen los medios empleados en cromatografía en capa fina, por lo que se consiguen mejores resoluciones y manchas más compactas. Las capas compactas se preparan aplicando una papilla del medio elegido en un disolvente adecuado, sobre las placas de vidrio.

En la cromatografía de capa fina es posible emplearse cualquier medio, habiendo discutido que factores influyen en la elección. Los más populares son la celulosa microgranular o micricristalina, gel de sílice (silica gel) en adsorción y reparto y alúmina.

La elección del disolvente dependerá de la naturaleza del compuesto que se va a separar y del material en que la separación va llevarse a cabo. Una regla general para la elección del disolvente es la comparación de la polaridad del mismo y de la sustancia que se va a separar, así aplicamos el criterio en el cual se emplea un disolvente poderoso (activos) para sustancias no polares y adsorbentes con menos actividad para sustancias más polares.

El revelado de las placas pude llevarse a cabo con agentes corrosivos, tal como ácidos concentrados y compuestos fuertemente oxidantes, a alta temperatura, debido a la naturaleza inorgánica de la capa.

Otro reactivo muy empleado son los vapores de yodo. En una cámara que contiene en el fondo algunos cristales de yodo, se introduce el cromatograma y se deja durante unos minutos. El yodo tiende a concentrarse en los sitios donde están los compuestos, por lo que aparece una mancha marrón oscuro, sobre el fondo amarillo pálido.

Otros métodos que no afectan el revelado son la fluorescencia y la radioactividad. Muchas placas llevan sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuestos, localizándose los mismos por la aparición de machas no fluorescentes. Además muchos compuestos que se separan absorben ultravioleta, siendo este el método más sencillo para localizarlos.

CROMATOGRAFIA DE COLUMNA (filtración en gel)

La cromatografía de filtración en gel se realiza empleando unas matrices formadas por unas esferas porosas. El volumen de los poros es muy elevado y su diámetro está determinado. Cuando penetran en el lecho de la columna dos proteínas de tamaños tales que una penetra en los poros de las bolas de gel y la otra no, la primera se reparte entre el espacio entre las bolas y el interior de los poros, reduciéndose la concentración en la fase libre entre las bolas. La segunda proteína, por tamaño, sólo puede encontrarse entre las bolas.

El flujo del solvente es más elevado entre las bolas que en el interior de los poros de éstas, por lo que el efecto neto es el de acelerar el desplazamiento de las proteínas de mayor peso molecular respecto al de las de menor peso molecular. En esta cromatografía se eluyen primero las proteínas mayores, y en segundo lugar las menores, y tiene una gran influencia en el resultado la longitud de la columna y el volumen de la misma. Columnas largas aseguran separaciones de mayor calidad. Empleando patrones de proteínas de peso molecular conocido se emplea para determinar el peso molecular de proteínas de tamaño desconocido.

Son numerosos los adsorbentes empleados en la cromatografía de columna. Las separaciones pueden realizarse por reparto, adsorción o intercambio iónico. Pueden usarse cualquier medio adsorbente, siendo los más generales la celulosa, gel de sílice, alúmina, oxido de magnesio. El tamaño de la columna está determinado por la cantidad de mezcla que se va a fraccionar.

El primer paso en el montaje de la columna cromatográfica es colocarla fija en posición vertical. A continuación se pone en la columna un disco de porcelana con varios orificios, y encima de este un poco de lana de vidrio. Este dispositivo retiene el material solido de la columna, mientras que el líquido puede circular libremente. El adsorbente puede introducirse en seco, pero lo más frecuente es echarlo en forma de una papilla con eluyente. La papilla formada por el adsorbente

...