Laboratorio 3 Biologia Celular

TRABAJO PRÁCTICO NÚMERO 3

Introducción

La biología celular en la actualidad ha tenido un avance muy notable, ya que se ha dado la aplicación de nuevos métodos para el análisis de las células en todos sus niveles.

Las células son muy pequeñas y además son traslucidas lo que hace imposible su observación por el ojo humano desnudo, es por esto la importancia de aprender correctamente el uso del microscopio, ya que esto nos permite a visualizar dichas células.

El desarrollo y el uso de nuevos métodos de tinción como es el azul de metileno, permitió una serie de descubrimientos en la estructura estudiada, permitiendo entender con claridad las estructuras y su organización, lo que es una importante ayuda para entender su comportamiento.

Las siguientes actividades tienen como finalidad dar a conocer los procedimientos a seguir en el uso del microscopio, así como identificar muestras permanentes y temporales. Esto nos permite enfocar cada uno de los comportamientos y características que se llevan a cabo en la célula y distintos tejidos.

Los resultados de distintos comportamientos de las preparaciones que aquí incluyen están diseñados para realizarse con el equipo de laboratorio con el que se cuenta en la facultad.

El desarrollo y el uso de nuevos métodos de tinción como es el azul de metileno, permitió una serie de descubrimientos en la estructura estudiada, permitiendo entender con claridad las estructuras y su organización, lo que es una importante ayuda para entender su comportamiento.

Toda la actividad práctica de laboratorio fue complementada a través de distintos sitios de internet.

Objetivos

Los objetivos generales de las actividades realizadas son: describir y analizar los principios básicos de microscopia, aprender el manejo de técnicas básicas de microscopia, como el montaje de preparaciones en portaobjeto y tinción de muestras, entender el principio de formación de la imagen, saber y aplicar el uso correcto del microscopio, enfocar cada una de las preparaciones realizadas en los diversos aumentos (de los objetivos), por ultimo identificar y reconocer cada componente celular contenido en cada una de dichas preparaciones, descubrir e interpretar lo observado.

Materiales y métodos

Para realizar estas actividades prácticas lo más importante es el uso del microscopio, ya que con el podemos visualizar cosas que a simple vista no vemos en una muestra, como por ejemplo se nos da en el caso de los cloroplastos que están en la Elodea, solo con el microscopio podemos ir identificando sus componentes y características a través de los distintos aumentos que este posee, otro material importante es el porta y cubre objeto, ya que son en estos materiales donde hacemos el montaje de nuestras preparaciones ya sean muestras temporales o permanentes; en una de estas actividades ocupamos aceite de inmersión para visualizar mejor el frontis sanguíneo, ya que este nos ayuda a restringir el movimiento de la muestra, también uno de los materiales necesarios para nuestros procedimientos es el azul de metileno ya que nos ayuda a definir las paredes celulares, como lo vimos en el caso de la cebolla, además ocupamos agua para la elodea y los protozoos para homogenizar la muestra por último el bisturí para poder tomar una muestra representativa de la cebolla.

Actividades y resultados

Actividad N°1: Calculo del aumento y limite de resolución del microscopio

Poder de aumento y apertura numérica de los lentes objetivos.

AUMENTO APERTURA NUMERICA

4x 0.10

10x 0.25

40x 0.65

100x 1.25

Aumento y la apertura numérica de él o los lentes oculares.

AUMENTO APERTURA NUMERICA

10x 18

Apertura numérica del condensador:

Apertura numérica (NA)

1.25

La resolución máxima del microscopio depende de la apertura numérica efectiva máxima que posea. Este valor máximo corresponde normalmente al lente 100x o lente de inmersión. Observe ahora los siguientes valores:

Apertura del lente 100x: 1.25

Apertura numérica del condensador: 1.25

Apertura numérica de la interfase de aire: 1,0

Apertura numérica de la interfase de aceite: 1,3 - 1,5

La apertura numérica efectiva máxima es el valor más bajo de los anteriores. Utilizando este valor menor de apertura numérica de trabajo, calcule el límite de resolución y la resolución de su microscopio asumiendo un λ= 400 nm, correspondiente a la luz visible.

Límite de resolución = 0.61x 40 nm = 195.2

1.25

Resolución = 1.25 = 0.00512

0.61x 40nm

Conclusión:

Es fundamental distinguir las diferencias entre límite de resolución y la resolución propiamente tal. El límite de resolución es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para que puedan visualizarse por separado, mientras que poder resolutivo es la capacidad de distinguir objetos distintos.

En conclusión la podríamos decir que ambas son inversamente proporcionales, ósea, la resolución aumenta cuando disminuye el límite de resolución y la resolución disminuye cuando aumenta el límite de resolución.

Estos valores dependen de la longitud de onda de la luz utilizada y de la apertura de la lente.

Actividad N°2 Manejo del microscopio

• Observamos la diferencia que se produce al utilizar el objetivo 10x con respecto a la muestra en el portaobjeto.

Letra “e” en el porta objetos Letra “e” observada en el objetivo 10x

La letra “e” vista en el objetivo 10x, se encuentra invertida en relación con el portaobjetos y ocupa todo el campo visual, se observa orificios, colores negros y café.

¿A qué se debe la diferencia observada? Esto será demostrado en la Discusión.

• Observando en el objetivo 40x se observa solo un trozo de la letra, además hay tonalidades oscuras y claras, café, transparentes, puntos de color morado. Estas tonalidades se ven como ramificaciones y la luz se traspasa a través de estas.

Letra “e” observada con el objetivo 40x.

¿Hay algún cambio en la orientación de la letra “e”?

Siguiendo todo el contorno de la letra, nos dimos cuenta que sigue en la misma orientación que la anterior, ósea invertida en relación con el portaobjeto.

ACTIVIDAD N° 3.1: Determinación del diámetro del campo visual.

Procedimientos y observaciones

4x – 10

10x – x

• DCV. OBJ. 10X = 10mm * 40x / 100x = 4

• DCV OBJ. 40X= 10mm * 40x/ 400x = 1

• DCV OBJ. 100X= 10mm * 40X/ 1000x = 0,4

Tomamos un papel de un cm2 de papel milimetrado, lo colocamos en un portaobjeto, el papel lo mojamos con agua destilada y se coloco el cubreobjetos.

Con el lente 4X enfocamos y observamos, calculamos el diámetro del campo visual contando la mayor cantidad de cuadros observados y teniendo en cuenta que cada cuadrado equivale a 1mm.

Transformamos las medidas obtenidas a unidades micrométricas, luego calculamos el diámetro del campo visual del resto de los lentes; 10X, 40X, 100X, empleando la siguiente formula.

DCV OBJ.X * aumento. Obj. 4X / aumento obj.

Lentes de los objetivos

DCV

10X 4

40X 1

100X 0,4

ACTIVIDAD N°3.2: Observación de preparaciones biológicas permanentes.

El objetivo general de esta actividad es reconocer las características de cada preparación y además observar que a través de la fijación estas reparaciones se mantienen con el tiempo.

En esta imagen podemos observar a simple vista los tres tipos de preparaciones:

En esta imagen podemos observar a simple vista los tres tipos de preparación:

Cada una de estas fueron vistas a [4x], lo que da un aumento total de la imagen de 40, a continuación se muestra la vista en microscopio óptico:

ACTIVIDAD N° 5: Determinación del tamaño celular (TC).

Determine este el valor de TC de la preparación de frotis anteriormente dibujada

TC= (DCV OBJ.X) / n° células

• (DCV OBJ. 100X) = 0,4

• N° células = 0,0026

TC= 0,4/154= 0,0026

TC= 0,0026

Una vez calculado el DCV de cada uno de los lentes objetivos, procedimos a estimar el tamaño celular (TC).

Utilizando la siguiente fórmula: TC= (DCV OBJ.X) / n° células

Para poder estudiar el valor de TC de la preparación de frontis de la imagen, se utilizo el objetivo 100X, consiguiente a esto para visualizar nuestras células utilizamos aceite de inmersión para poder visualizar con mayor precisión las células presentes, en la muestra movimos el objetivo hacia el

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