Transgenesis De Tilapia

INTRODUCCIÓN:

Las cepas transgénicas de pescado ofrecen algunas ventajas claras para la acuicultura ( Iyengar et al, 1996;. naclean, 1998), pero plantean problemas de impacto ambiental en caso de fuga o liberación. Una forma de reducir o eliminar este problema es hacer que tales peces estériles.

A través de la inducción triploide y la condición de que también se utiliza alguna forma de contención efectiva. inducción triploide se ha utilizado en el cultivo de peces, debido a su capacidad percibida. Por Shocking el huevo recién fertilizado poco después de la fertilización, el segundo cuerpo polar, que normalmente se destruye después de la fertilización, es retenida, y como resultado, el huevo fertilizado contiene tres núcleos haploides que, en la fusión, forman un núcleo que es cigoto triploide (Tave, 1993). La esterilidad puede evitar la reproducción no controlada y por lo tanto es beneficioso cuando el período de cultivo se extiende más allá de la madurez sexual (Boulanger, 1991). Lo más importante es que puede crear peces que no serán capaces de hibridar y contribuir al acervo genético local si fueran a escapar accidentalmente de estanque confinamiento (Tave, 1993).

La esterilidad es inducida por la triploidía debido a la ocurrencia de incompatibilidad gamético durante la meiosis desde triploides con tres cromosomas homólogos no se alinean bien y no hay impedimento para el emparejamiento de los cromosomas durante la meiosis I. Esto provoca dificultad en la meiosis como los cromosomas no se dividen a partes iguales, lo que resulta en irregulares la separación de los cromosomas abortado trillizos (Myers, 1986). Como resultado, los gametos que contienen números desequilibrados de cromosomas, denominados aneuploides, se producen, y gametos aneuploides generalmente producen descendencia anormal y sub-viable que rara vez sobreviven (Benfey, 1991). Muchos estudios han demostrado que los triploides no sólo tienen gónadas anormales, pero también producen menos gametos, que son en sí mismos generalmente anormal .Los triploides fueron producidos primero artificialmente en el pez espinoso a través de la aplicación de choque de calor a los huevos fertilizados normalmente .Desde entonces, los triploides producidos por choque térmico se han producido en muchas otras especies como el bagre de canal (Chrisman et al, 1983.), La trucha arco iris (Quillet et al, 1988;.. Kim et al, 1988), carpa común (Hollabecq et al., 1988), y la tilapia (Penman et al.,

Además de choque térmico, otros medios de la producción de peces triploides, como golpe de frío, una descarga de presión, y los productos químicos, también han sido empleados por diversos investigadores (Tave, 1993). Las tilapias son una fuente de proteína barata, especialmente en los países tropicales y subtropicales subdesarrollados. Interés en la investigación previa en la producción de tilapia triploide se ha centrado en tratar de resolver el problema de la madurez precoz y la reproducción no controlada, que a menudo resultó en sobrepoblación de peces juveniles en estanques de cultivo. En los últimos años, el laboratorio tiene éxito en tilapia transgénico producido con un rendimiento de crecimiento elevada .Debido a la preocupación sobre el impacto de estos peces en el medio ambiente natural en el caso de evasión en el medio natural, actualmente se examinan métodos para inducir esterilidad. Uno de estos es por el calor chocantes los huevos fertilizados en transgénicos para producir triploides estériles transgénicos, aunque tales peces también tendrían que ser contenida con seguridad. También estamos

trabajando en una estrategia transgénica alternativa para garantizar la esterilidad, pero esto puede ser algunos años de distancia .El beneficio de la triploidía inducida en el aumento del crecimiento no suele ser evidente hasta después del período de maduración en diploides no transgénicos por lo que la inhibición del desarrollo gonadal puede resultar en un aumento del crecimiento somático . Debido a que estas tilapias transgénicas son de un mayor crecimiento en un período mucho más temprano, pero interesa averiguar si el logro del estado triploide tiene algún efecto sobre las tilapias ya de crecimiento mejorada tanto en peces adultos no transgénicos y transgénicos en comparación con las tilapias no transgénicos diploides normales. A través de la combinación de las técnicas de manipulación cromosómica conjunto (inducción de triploidía) y genéticas ingeniería (inducción de transgénicos), el objetivo es producir tilapias transgénicas que son triploides estériles. interés en la investigación

en triploidía no está en la triploidía en sí, sino en su capacidad para interrumpir el desarrollo de las gónadas que de este modo hacer que los peces sean de mayor crecimiento estéril.

RESUMEN:

inducción triploide ofrece una forma de reducir considerablemente la fertilidad en el pescado, y por lo tanto podría ser empleado para ayudar a asegurar que cualquier impacto ambiental adverso de peces transgénicos notablemente.

con el fin de producir un crecimiento potenciado peces transgénicos estériles, hemos inducido triploidía en líneas de tilapia transgénica. el desarrollo,y el rendimiento del crecimiento gonadal fueron analizados siguiendo triploidización por choque térmico. estado de ploidía se confirma por la medición del tamaño nuclear de eritrocitos. se encontraron los eritrocitos de triploides 1,5 veces más grande que los diploides.

Observaciones:

mejora del crecimiento y el desarrollo gonadal se realizaron en diploides y triploides de lotes de hermanos completos tanto transgénicos y no transgénicos. en ambas líneas, diploides transgénicos fueron superiores en el desempeño del crecimiento, seguida de triploides transgénicos, no transgénicos diploides y triploides no transgénicos. aunque los testículos de los triploides transgénicos fueron significativamente menores que los de los triploides no transgénicos, histológicamente no mostraron signos de gran deformación. también hubo algunos espermatozoides presentes en los testículos de algunos triploides, que podría ser indicativo de la funcionalidad reproductiva. Howerer, los ovarios fueron de ovocitos, y deformados en todo triploides y estaban completamente funcional. aunque el mejor desempeño de crecimiento fue demostrado por los transgénicos diploides fértiles, las hembras transgénicas triploides podría ofrecer una buena opción para fines de acuicultura debido a que mostraron un rendimiento superior sobre el crecimiento de las tilapias de tipo salvaje normales con la ventaja de la esterilidad para asegurar la no hibridación y no contaminación con el acervo genético local. Howerer cuidadosa monitorización de flujo génico potencial se requiere antes de comercializar.

MATERIALES Y MÉTODOS :

Construcción de ADN de Transgénicos .Los peces utilizados fueron la progenie G3 de los fundadores de tilapias transgénicas con construcciones de ADN OPAFPc ,sGH y

CarpbALacZ. El OPAFPc sGH es una construcción de la hormona de crecimiento que contiene el promotor del gen anticongelante puchero océano .Además de los 58 y 38 secuencias no codificantes del gen empalmados a un cDNA de hormona de crecimiento del salmón chinook (Universidad de Toronto, Canadá). La otra construcción, CarpbALacZ, es una construcción de gen informador que comprende las secuencias reguladoras Carpb-actina empalmados para el gen B-galactosidasa bacteriana (Alam et al., 1990). Ambas estas inserciones se coinjected para producir los fundadores de las dos líneas (C118 y C86) cuya progenie G3 se utilizaron en este estudio. Estos progenie G3 fueron producidos por el cruce de G2 machos transgénicos homocigotos de cada línea con las hembras de tipo salvaje. Producción de transgénicos .los análisis transgénico

de estos peces co-expresan tanto la hormona de crecimiento salmón y b-galactosidasa, estado transgénico se pudo confirmar mediante la detección de expresión de la proteína lacZ en los tejidos musculares de los adultos de tilapia individuales por histofirmed a través de la detección de la expresión de la proteína lacZ en los tejidos musculares de los adultos de tilapia individuales por histoquímica tinción in situ con X-gal (5-bromo-cloro-3-indolil-B-D-galactosidasa) como sustrato. la expresión de LacZ puede ser fácilmente detectado como un precipitado azul en el nivel de una sola célula, y por lo tanto representa un marcador visual in situ de la transgén. Se eligió este método porque es mucho menos tedioso que los métodos inmunohistoquímicos. Brevemente, las tilapias adultas se anestesian letalmente, y los músculos se extirpan e inmediatamente se fijaron en fijador recién hecho (2% de paraformaldehído, 0.2% de glutaraldehído, 0,02% de Nonidet P-40, en fosfato de sodio 0,1 M, pH 7,6) durante 5-6 horas a 4 ° C. Los tejidos musculares se lavaron en solución salina con fosfato (PBS), pH 7,6, for3 × 5 minutos, y luego inmerso en X-gal mezcla de reacción histoquímica (1 mg / ml de X-gal, fosfato de sodio 100 mM, pH 7,6, 1,3 mM de MgCl2, 3 mM de K3Fe (CN) 6, 3 mM de K4Fe (CN) 6, 0,02% de Nonidet P-40). La incubación fue a 30 ° C durante la noche. sobre finalización de la tinción, los tejidos se lavaron en PBS (3 × 5 minutos), fotografiado, y después se almacenaron a 4 ° C triploide inducción .Los huevos se sorprendieron con calor a 41 ° C, 5 minutos después de la fecundación, en lotes de entre 200 y 250 huevos, que se celebró en una malla de canasta durante 3,5 minutos de duración según lo descrito por

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