Control De Calidad
leandra32319 de Mayo de 2015
3.560 Palabras (15 Páginas)211 Visitas
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Para la determinación de la
sensibilidad a los antimicrobianos
en bacterias aisladas de humanos
Ministerio de Salud
Subsecretaría de Investigación y Tecnología
ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS
Departamento Bacteriología
Servicio Antimicrobianos
Buenos Aires, Argentina
2001
Servicio Antimicrobianos - INEI – ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”
2
INDICE
METODO DE DETERMINACION DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR DIFUSION ................ 3
1.0. INTRODUCCION ......................................................................................................................... 3
2.0. INDICACIONES PARA LA REALIZACION DE LOS TEST DE SUSCEPTIBILIDAD .................. 4
3.0. SELECCION DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS PARA LAS PRUEBAS DE
SENSIBILIDAD.................................................................................................................................... 4
4.0. REACTIVOS PARA EL TEST DE DIFUSION POR DISCO ....................................................... 7
5.0. PROCEDIMIENTO para la realización del test de difusion por disco......................................... 9
6.0 Microorganismos Fastidiosos.................................................................................................... 11
7.0. DETERMINACION DE ß-LACTAMASAS ................................................................................ 16
8.0. Interpretación de los resultados del método de difusión por disco............................................ 17
9.0. CONTROL DE CALIDAD .......................................................................................................... 18
10. Limitaciones del metodo de diFUSION por discos ................................................................... 22
DETERMINACION DE LA SENSIBILIDAD ........................................................................................... 28
A LOS ANTIMICROBIANOS POR EL METODO DE DILUCION......................................................... 28
1.0 INTRODUCCION ........................................................................................................................ 28
2.0 INDICACIONES PARA REALIZAR PRUEBAS DE SENSIBILIDAD........................................... 28
3.0. AGENTES ANTIMICROBIANOS .............................................................................................. 29
4.0. SELECCION DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS PARA LAS PRUEBAS DE RUTINA E
INFORME DE LOS RESULTADOS .................................................................................................. 31
5.0 PREPARACION DEL INOCULO PARA LAS PRUEBAS DE DILUCION ................................... 32
6.0 PROCEDIMIENTO PARA LA DILUCION EN AGAR ................................................................. 32
7.0 METODO DE DILUCION EN CALDO (MACRO Y MICRODILUCION) ..................................... 35
8.0 MICROORGANISMOS CON EXIGENCIAS NUTRICIONALES ESPECIALES ..................... 39
9.0 MICROORGANISMOS PROBLEMA ....................................................................................... 40
10.0 DETERMINACION DE ß-LACTAMASAS .............................................................................. 42
11.0 INFORME DE LOS RESULTADOS ....................................................................................... 43
12.0 PROCEDIMIENTOS PARA EL CONTROL DE CALIDAD....................................................... 43
13. Limitaciones de los metodos de dilucion.................................................................................... 49
14.0 PRUEBAS DE "SCREENING" .................................................................................................. 50
APENDICE A. DIAGRAMA DE FLUJO DE LOS PROTOCOLOS DE CONTROL DE CALIDAD .... 51
APENDICE A. (Continuación) ........................................................................................................... 52
RESUMEN GENERAL DE RECOMENDACIONES DEL ...................................................................... 55
NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORATORY STANDARDS (NCCLS) ........................... 55
Alejandra Corso................................................................................................................................. 55
Streptococcus pneumoniae :............................................................................................................. 55
Streptococcus spp :........................................................................................................................... 56
Haemophylus spp.............................................................................................................................. 57
N. meningitidis :................................................................................................................................. 58
Staphylococcus spp .......................................................................................................................... 58
Enterococcus spp.............................................................................................................................. 59
Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE) en E. coli , K. pneumoniae y K.oxytoca:............... 60
Vibrio cholerae : ................................................................................................................................ 61
Morganella spp :................................................................................................................................ 61
Providencia spp................................................................................................................................. 61
Pseudomonas aeruginosa................................................................................................................. 61
Acinetobacter spp.............................................................................................................................. 62
Moraxella catarrhalis ......................................................................................................................... 62
Antimicrobianos con recomendaciones particulares......................................................................... 62
Mas cepas de referencia para Control de Calidad........................................................................... 63
Condiciones Metodológicas para la Detección y Confirmación de la Presencia de BLEE en E. coli ,
K. pneumoniae y K.oxytoca............................................................................................................... 64
1) Método de difusión :...................................................................................................................... 64
2) Método de Dilución ....................................................................................................................... 65
NOVEDADES DEL NCCLS 2001.......................................................................................................... 66
Servicio Antimicrobianos - INEI – ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”
3
METODO DE DETERMINACION DE SENSIBILIDAD
ANTIMICROBIANA POR DIFUSION
1.0. INTRODUCCION
La técnica actualmente utilizada para la determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos es
el producto de importantes esfuerzos internacionales desde hace más de dos décadas enfocados
a normatizar el método.
El comité de expertos de la OMS. y grupos colaborativos internacionales dirigidos por Ericsson y
Sherris sugirieron recomendaciones que fueron seguidas por la mayor parte de los países
europeos.
Sin embargo, la falta de un acuerdo general sobre los puntos de corte para la interpretación de
estas pruebas continúan siendo un tema de importantes esfuerzos internacionales. Europa está
dividida en varias regiones de influencia con diferentes sistemas de sensibilidad antimicrobiana :
Grupo Sueco de Referencia en Antimicrobianos, el Sistema DIN, el de los países bajos, la
Sociedad Británica de Antimicrobianos, la Sociedad Francesa de Microbiología y el Comité
Americano de Estandarización de Laboratorios Clínicos (NCCLS).
En nuestro país y en la mayoría de los países latinoamericanos se siguen las pautas del NCCLS
con algunas modificaciones.
El siguiente es un resumen de la metodología referida habitualmente como "Método de la OMS.",
que no difiere substancialmente del conocido "Kirby-Bauer". Las tablas de interpretación fueron
tomadas de las normas M2 – A7 del National Committee for Clinical Laboratory Standards
(NCCLS) de Enero de 2001.
El principio del método involucra el uso de una cantidad constante de antimicrobianos en un
reservorio (discos de papel) aplicado sobre la superficie del agar en el cual se ha cultivado el
microorganismo en cuestión. Se formará así por difusión, un gradiente de concentración del
antimicrobiano y la sensibilidad del microorganismo estará indicada por el tamaño de la zona de
inhibición del crecimiento alrededor del reservorio. El diámetro obtenido dependerá
...