Ureasa Practica De Bioquimica

UNIVERSIDAD DE SONORA

División de Ciencias Biológicas y de la Salud

Introducción

La peroxidasa es una hemoproteína altamente específica para el aceptor de hidrogeno, que es el peroxido de hidrogeno, pero es muy inespecífica en cuanto al sustrato donador que utiliza, que puede ser una de muchas sustancias, por ejemplo: fenoles, aminofenoles diaminas, indofenoles, leucocolorantes, ascorbato e incluso ciertos aminoácidos como tirosina.La reacción se puede seguir de la siguiente manera:Donador reducido + H2O2 peroxidasa donador oxidado + 2H2OEsta enzima se encuentra en la mayoría de las plantas y en ciertos microorganismos, pero es escasa en los tejidos animales. Se observa la actividad de la peroxidasa en la leche (lactoperoxidasa), en los leucocitos (leucoperoxidasa) o mieloperoxidasa), en la placenta una de las formas más activas en la peroxidasa del rábano.El mecanismo de acción es sumamente parecido al que se propone para la catalasa, a través de la formación de un complejo. Más aun, en este caso son diversos los complejos los complejos que se forman entre la enzima y el peroxido de hidrogeno de que sea capaz de reaccionar con el donador reducido.La polifenol oxidasa recibe muchos nombres debido a la gran diversidad de sustratos que emplea. Técnicamente es una o-difenol: oxigeno reductasa. Su reacción se puede describir de la siguiente manara:2 o- difenol + O2 polifenol oxidasa 2O-quinona + 2 H2OEsta enzima puede llevar a cabo la oxidación directa aerobia de compuestos mono y difenoles (tirosina, fenol, p-cresol, 3, a-dimetil fenol, 4-terbutilfenol). También puede atacar a o-difenoles y a la adrenalina. Es una enzima de peso molecular 120.00, con un centro de cobre.La polifenol oxidasa de la papa ataca a los siguientes compuestos en orden de mayor a menor actividad: acido clorhídrico, catecol, quercitina, piragalol, acido cafeico, 3,4-dihidroxifenilalanina, p-creso, tirosina entre otros. Las quinonas resultantes de la reacción de la polifenol oxidasa pueden continuar oxidándose y polimerizándose, para dar compuestos finales que son muy complejos y coloridos.Es difícil distinguir las actividades de las dos enzimas a partir de la misma fuente, ya que pueden atacar a los mismos substratos. De Sin embargo utilizando papa como fuente de las enzimas, la reacción de la peroxidasa es mucho mas rápida, cosa que puede permitir la observación de las dos acciones 1

Objetivo

Observar y comprobar la actividad e inhibición de peroxidasa y polifenol oxidasa, utilizando como fuente de las enzimas un extracto de papa.

Materiales y métodos

PROCEDIMIENTO

Lo indicado en este punto debe hacerse lo más rápido posible. lave y pele una papa chica . Se corto en pedazos pequeños y se agrego a un vaso de precipitados que contiene 100 mL de agua destilada que se enfrió previamente en un baño de hielo, esto es para que no se oxide la papa y dejar reposar por 10 minutos.Al pasar los 10 minutos se filtro la mezcla a través de un pañuelo, a un vaso de precipitados que este sumergido en el hielo. Después de filtrar se desecho la pulpa de la papa. El filtrado de dejo reposar por 5 minutos para que se asiente el almidón en el fondo. Después se decanto el líquido para desechar el almidón. Lo que se obtuvo se llama extracto de papa.

En la gradilla se prepararon 13 tubos numerados del 1 al 13• En los tubos 1,2,3,4 y 11 se pipeteo catecol• En los tubos 5,6,7,8 y 12 se pipeteo pirogalol• A los tubos 9 y 10 se pipeteo tirosina• En los tubos 2, 4, 6, 8, 10, 11 y 12 se pipeteo peróxido de hidrogeno• En dos tubos de ensaye aparte se pipeteo 5 mL del extracto y se calentó por 5 minutos. Después se agrego a los tubos 3 y 4 y se dejaron enfriar.• A los tubos 11 y 12 se les agrego 5 mL de agua destilada• Al final se agrega a las tubos 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10 y 13 5 mL del extracto de papa y se observa el cambio de color de los tubos a los 2, 5, 10 y 15 minutos y se anotaron los resultados.

Material• Gradilla• 15 tubos de ensaye de 13 x 100• 2 vasos de precipitados de 250 mL• 1 pipeta de 5 mL• Pinzas para tubos de ensaye• Mortero• Bandeja para hielo• Agitador• 3 pipetas de 1 mL• Mechero• Tripie• Tela se asbestos*Hielo*Una papa*Pelador de papas*Un pañuelo para filtrarReactivos• Peróxido de hidrogeno 3 %• Catecol 1 %• Pirogalol 1 %• Tirosina 1 %• Cianuro de sodio

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