Microbiologia

INTRODUCCION

Para cada bacteria a ser cultivada para cualquier propósito es necesario proveer el ambiente bioquímico y biofísico apropiado. El ambiente bioquímico (nutricional) se hace disponible como medio de cultivo, y dependiendo de las necesidades especiales de cada bacteria particular se ha desarrollado una gran variedad y tipos de medios de cultivo con diferentes propósitos y utilizaciones. Los medios de cultivo son empleados para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y también son utilizados para la identificación de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioquímicas y fisiológicas.

El modo en que las bacterias son cultivadas, y el propósito de los medios de cultivo, varían ampliamente. Los medios líquidos son utilizados para el crecimiento de lotes de cultivos puros mientras que los medios sólidos son ampliamente utilizados para el aislamiento de cultivos puros, para la estimación de poblaciones de bacterias viables, y una variedad de otros propósitos. El agar, agente gélido más utilizado para medios sólidos o semisólidos, es un hidrocoloide derivado de las algas rojas. El agar es utilizado por sus propiedades físicas únicas (se funde a 100 grados y permanece líquido hasta enfriarse a 40 grados, la temperatura a la que se vuelve gel) y porque no puede ser metabolizado por la mayoría de las bacterias. Por lo tanto, como un componente del medio es relativamente inerte, simplemente mantiene (geliza) los nutrientes que se encuentran en la solución acuosa.

La complejidad de los muchos procesos microbiológicos e igualmente de las muchas pruebas existentes para verificar dichos procesos es tan grande que se tienen estructurados procedimientos para identificar, cuantifica y ver método de acción lo que cada día aporta más conocimientos y enriquece el saber de la vida microbiología

En este informe de laboratorio estaremos tratando básicamente tres experiencias unificada en una sola, desarrollando protocolos o procedimientos nuevos para nuestros conocimientos y muy provechos para nuestra vida como profesionales.

Los antibiogramas son pruebas microbiológicas que se realizan para determinar la sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibiótico o grupo de antibióticos y esta tiene como primer objetivo medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos. El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolución de las resistencias bacterianas

Al terminar de desarrollar este informes estamos en la capacidad igualmente de describir la morfología de hongos y micro cultivos preparados en el laboratorio de microbiología de la universidad de córdoba.

PROCEDIMIENTO

ANTIBIOGRAMA.

 Se tomo con el asa de siembra previamente esterilizada 3 colonias de un cultivo bacteriano reciente; en este caso los cultivos fueron de E. Coli y Streptococcus, y se suspendió en 3ml de solución salina estéril.

 Se introdujo el hisopo de algodón estéril en la suspensión bacteriana y se elimino el exceso de líquido sobre la pared interna del tubo.

 Se inoculo la superficie de una placa de Mueller Hinton con el asa de vidrio; de forma que se consiguió una distribución homogénea que cubrió todo el agar.

 Se coloco rápidamente los discos de antibióticos con una pinza sobre la superficie del agar, a una distancia minina unos de otros, presionándolos ligeramente con el fin de asegurar contacto con el agar.

 Se incubo la placa en posición invertida a 37° C durante 24 horas.

 Se midieron los halos de inhibición “expresados en milímetros”, y se caracterizo a la bacteria como sensible, intermedia o resistente a cada uno de los antibióticos analizados.

DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA DE HONGOS YMICROCULTIVOS

1. Observación de levadura

En un porta objeto se coloco una gota de Lugol. Luego se tomo una asada de la suspensión de levadura y se hizo una emulsión con el asa: se coloco un cubre objetos y se observo al microscopio con 40x.

1.1 Observación de mohos

1. Se examinaron las colonias de hongos presentes en las cajas de cultivo.

2. Se preparo una placa tomando con el estilete estéril una muestra de cultivo (Penicillium chrysogenum); se deposito en un porta objeto al cual se le había adicionado una gota de azul de lactofenol; luego se le coloco una laminilla la cual fue presionada con la yema de los dedos. Se observo al microscopio con 40x; se hizo esquema de lo observado.

1.2 Preparación de un microcultivo:

a. Se tomo un porta objeto estéril, se coloco una porción de agar Sabouraud.

b. Se tomo estilete estéril una muestra de cultivo de hongos y se sembró en el centro del agar rompiendo este.

c. Se cubrió el agar con una laminilla presionando un poco.

d. Se coloco el porta objetos en una cámara húmeda. Esta consistía en una caja de Petri, con un papel filtro en su interior y una varilla de vidrio en v.

e. Se humedeció el papel de filtro completamente. Se tapo la caja y se dejo a temperatura ambiente. Se hicieron observaciones después de las 24 horas.

RESULTADOS Y ANÁLISIS

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO.

Cada uno de los medios se preparo siguiendo las instrucciones, quedando listos para las siembras respectivas que se iban a desarrollar en la siguiente práctica.

Agar RM/VP: este agar es un Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer. Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias. En la práctica su color inicial fue amarillo.

Agar SIM: el agar SIM es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo.

Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. En la práctica este presento un color inicial amarillo claro.

Agar citrato de Simons: es un medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía. En nuestra práctica este agar presento un color verdoso.

Agar TSI: este es un medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico, su color inicial fue rojo claro.

Agar Macconkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo. Este agar presento un color café claro.

Agar LIA: Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. En la práctica este medio quedo de un color lila.

Agar Salmonella – Shigella (s-s): El SS es un medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia. El color inicial que presento fue un tono rojo.

Agar urea: Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos. Este medio tomo un color amarillo.

Agar XLD: El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de patógenos entéricos Gram negativos, especialmente del género Shigella. El medio presento en la práctica un color naranja.

Agar sangre: este es un medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observación de reacciones de hemólisis. También, este medio de cultivo, puede utilizarse como un medio base para preparar el medio agar chocolate. En la práctica presento un color rojo oscuro.

RM/VP: En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros. Voges y Proskauer.Es, describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar hidróxido de potasio

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